1、 首先根据实验需要设置几组不同稀释比例的反应管（建议设置2或3个样本重复）。
2、开机，将反应管置于PCR仪反应釜中，打开BIO-RAD CFX软件，找到预设PCR程序（file—open—protocol），按照正常实验流程依次完成Run Setup，并存储结果。
3、此时程序已开始运行，回到程序主界面，进入“Real-time status”子界面，点击下方Plate setup ，选择“即枢潋雳view/ edit plate”进入编辑界面。（也可待反应结束后以同样方法点击右上方Plate setup ，选择“view/ edit plate”进入编辑界面。）
4、可先勾选 “exclude wells in analysis ”排除空白位置。然后选中用于绘制标准曲线的样本位置，移动鼠标换纪藿钒至右侧：①更改sample type 为 “standard”，②点击Replicat Series设置重复管，③点击Dilution Series设置稀释比例。最后点击OK即可自动生成标准曲线。敲黑板：此处难点在于一次程序中单独设置多组不同样本的稀释标准曲线。以两组：纵向4个稀释度，横向各样本3个重复管为例。
5、此时具体操作为：先选中第1组，点击Replicat Series设置Replicate size为3，starting r髫潋啜缅eplicate # 为1，horizontal，点击apply。继续设置稀释度，此时第一组将包括“std-1,std-2,std-3,std-4”4个稀释度。然后选择第2组，此时Replicate size依旧为3，此时starting replicate # 应为5（上一组稀释度数目+1）。否则程序会报错。依此方式可在同一次反应中设置多组稀释曲线。
6、虽然我们可在一次反应过程中设置多组稀释样本的标准曲线，但是程序最后默认为一条标准曲线。若想单独显示第一组，需重新进入Plate Setup界面利用“exclude wells in analysis ”隐藏其他组。
7、标准曲线下方列出扩增效率（E）、相关系数（R）等参数。调节左侧amplification中基线水平，前述参数会相应改变，从而找到最优。
8、利用Export导出相应数据即可进行后续分析。